试管中菌丝长满试管,就可进行原种繁殖。二,母种向原种扩繁。母种扩繁成原种需要经历以下几个步骤,分别是培养基制作、培养基装瓶(袋)灭菌、接种、原种培养等。【1】培养基制作。培养基的原料种类,由蘑菇种类决定,是制作植物籽粒种、还是木屑种、或者是枝条种,由种植者自行决定。培养基制作时,要注意培养基的配方组成,组成依据是种植蘑菇品种所要求的培养基的碳氮比,同时注意培养基的含水量和PH值要达到要求,在培养基搅拌过程中,各种原料要搅拌均匀。
【2】培养基装瓶(袋)和灭菌。▪培养基制作完毕,就要装瓶(袋)后灭菌,菌种瓶(袋)要选用专业标准的制式,利于机械装瓶(袋)。▪灭菌可采用常压和高压灭菌两种方式。灭菌时要注意以下几点:⑴常压灭菌要注意种瓶(袋)的摆放,特别是采用袋装的原种,要注意摆放时不能挤压,袋间要有合适间距,不能影响灭菌效果。⑵常压和高压灭菌都要排尽灭菌仓中的冷气,避免灭菌仓内形成冷死团,造成灭菌不彻底的后果。
⑶常压灭菌和高压灭菌,都要保证灭菌时长和灭菌温度。常压灭菌温度为100℃,并在这个温度条件下持续12小时以上,期间出现温度降低,要重新计时。高压灭菌温度要达到121℃,压力达到0.105Mpa在这个状态下保持90~120分钟。⑷常压灭菌,灭菌完毕,培养基瓶(袋)要继续在灭菌仓中放置10小时以上,这个过程称为焖锅,可以增强灭菌效果。
【3】接种。接种可以在接种箱中完成,也可以在接种室中完成,前提是必须做好接种箱和接种室的消毒灭菌,使其处于无菌状态。⑴接种前接种箱或接种室的灭菌。▪接种箱采用福尔马林或绿霉净、百菌清等灭菌药剂擦拭,结合必洁仕或菇虫净、菇菌净等气雾剂熏蒸的方法进行灭菌处理。熏蒸灭菌时,接种工具一并接受灭菌处理。▪接种室采用必洁仕或菇虫净、菇菌净等气雾剂熏蒸灭菌,结合紫外线照射的方法进行。
灭菌时,缓冲间与更衣室同步进行,接种工具、接种人员着装一并接受灭菌处理。⑵做好试管种带进接种箱或接种室的前后消毒灭菌。试管种进入接种箱或接种室前要用75%酒精全面擦拭试管外壁,进入后再次擦拭试管外壁和试管与胶塞连接处。⑶做好接种时的保护。▪接种箱接种要在酒精灯火焰保护下进行接种。▪接种室接种时,要全程开启接种保护器。
⑷接种时,要减少菌种暴露时间。▪接种箱接种时,接种完毕,要立即扎紧原种袋口或盖好瓶塞。▪接种室接种时要严格执行接种操作规程,人员要换好着装,做好手部消毒,经缓冲间进入接种室,尽量避免走动,防止扬尘感染,接种完毕立即盖好瓶口或扎紧袋口,减少菌种空间暴露时间。接种完毕,需迅速把原种瓶(袋)运进菌种培养场所,进行培养。