【2】PDA培养基制作。①培养基配方。水1000毫升、马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g。按此数量制作的培养基，可装试管20支左右。②煮制培养基。马铃薯去皮切成颗粒状，量杯量取1000毫升水，与马铃薯碎块一起放入铝锅中煮沸，半小时后，多层纱布过滤所煮液体，放进量杯，液体加入琼脂、葡萄糖，搅拌至琼脂融化，水量补足1000毫升。
③装试管并扎捆。趁热把培养基用漏斗装入试管，培养基量至试管的1/5~1/4，盖好胶塞后，用扎绳每7支捆成一捆。④灭菌。试管捆扎完毕，放进高压锅进行高压灭菌。灭菌温度121℃，压力0.105Mpa，这个状态下保持30分钟后，停止灭菌，期间要注意排尽高压锅中的冷气。⑤培养基斜面操作。把试管倾斜放置，让培养基形成斜面，斜面顶部位置在试管长度的1/2处。
试管上应放置厚毛巾等物保温，避免试管内有水珠出现。【3】接种转管。①把试管放入经灭菌处理呈无菌状态的接种箱，做好母种试管消毒灭菌后带入接种箱，再进行一次外壁消毒。②点燃酒精灯，在酒精灯火焰的保护下，打开母种试管和接受转接试管，进行接种，接种完毕立即盖好胶塞。③恒温培养。把接种完毕的试管，放入恒温箱进行培养，一般品种的蘑菇温度保持恒温在22~25℃之间，正常情况下，10~15左右，菌丝就能长满试管。
试管中菌丝长满试管，就可进行原种繁殖。二，母种向原种扩繁。母种扩繁成原种需要经历以下几个步骤，分别是培养基制作、培养基装瓶（袋）灭菌、接种、原种培养等。【1】培养基制作。培养基的原料种类，由蘑菇种类决定，是制作植物籽粒种、还是木屑种、或者是枝条种，由种植者自行决定。培养基制作时，要注意培养基的配方组成，组成依据是种植蘑菇品种所要求的培养基的碳氮比，同时注意培养基的含水量和PH值要达到要求，在培养基搅拌过程中，各种原料要搅拌均匀。
【2】培养基装瓶（袋）和灭菌。▪培养基制作完毕，就要装瓶（袋）后灭菌，菌种瓶（袋）要选用专业标准的制式，利于机械装瓶（袋）。▪灭菌可采用常压和高压灭菌两种方式。灭菌时要注意以下几点:⑴常压灭菌要注意种瓶（袋）的摆放，特别是采用袋装的原种，要注意摆放时不能挤压，袋间要有合适间距，不能影响灭菌效果。⑵常压和高压灭菌都要排尽灭菌仓中的冷气，避免灭菌仓内形成冷死团，造成灭菌不彻底的后果。
⑶常压灭菌和高压灭菌，都要保证灭菌时长和灭菌温度。常压灭菌温度为100℃，并在这个温度条件下持续12小时以上，期间出现温度降低，要重新计时。高压灭菌温度要达到121℃，压力达到0.105Mpa在这个状态下保持90~120分钟。⑷常压灭菌，灭菌完毕，培养基瓶（袋）要继续在灭菌仓中放置10小时以上，这个过程称为焖锅，可以增强灭菌效果。
